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5-19
微孔濾膜培養小室及雙室聯合培養系統（Transwell實驗）：應用微孔濾膜培養小室，進行膠質瘤細胞與內皮細胞的聯合培養，可以更接近體內環境，模擬瘤細胞對血管內皮細胞的作用，濾膜上8μm的微孔可允許內皮細胞穿過到達膜的下面，這些穿越遷移的內皮細胞可粘附于膜的下面，通過計數濾膜下面的細胞可基本反映細胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上室內添加上層培養液，下室內添加下層培養液，上下層培養液以膜相隔。將...
5-19
一、實驗原理各種細胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數，可采用臺盼藍染料排斥實驗（Phillips1973)。正常的健康細胞能排斥染料，但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法，無法區別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。二、實驗方法1)胰蛋白酶處理細胞，無菌狀態下取0.5ml細胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...
5-19
一、細胞轉染細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染兩大類。本實驗室主要是質粒轉染、miRcroRNA轉染、慢病毒轉染、藥物轉染、多肽轉染等。二、miRcroRNA轉染（一）實驗材料及試劑六孔板、CO2培養箱、EP管、酒精燈等；無血清培養基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細胞等。（二）實驗內容1當六孔板中MSC細胞密度達90％時，準備轉染，將無血清培養基、MEM-α或DMEM取出...
5-19
流式細胞術檢測細胞周期1。實驗原理用流式細胞儀檢測細胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細胞核。PI在一定波長的光下發出熒光，其強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數，可檢測細胞的增殖、凋亡。2。流式細胞儀檢測A549細胞周期步驟收集對數生長期細胞，計數，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養過夜，使細胞貼壁。次日更換培養液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...
5-14
1、炎癥灶內主要是巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤。單核吞噬細胞的浸潤對慢性炎癥十分重要。單核細胞從血管游出后轉化為巨噬細胞。巨噬細胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產生吸引單核細胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質及膠原和纖維粘連蛋白的分解產物等。因此，從血液循環中滲出的單核細胞源源不斷來到局部，這是局部巨噬細胞的主要來源。②游出的巨噬細胞在局部通過有絲分裂而增殖，但巨噬細胞局部增殖的起始動因還不清楚。③炎癥灶內的巨噬細胞...
5-14
激光掃描共聚焦顯微鏡可測定的樣品種類很多．包括生物材料、組織(切片)、細胞(亞細胞)結構等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種：自發熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發和發射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1．觀察步驟及儀器操作根據實驗要求制備樣品完畢后。即可進行觀察。基本步驟如...
5-14
人非小細胞肺癌裸鼠原位種植轉移模型的建立：（1）探討肺癌遠處轉移和阻斷其遠處轉移的研究；（2）模擬晚期非小細胞肺癌轉移的自然發生過程；（3）在活體動物的完整器官內評估瘤細胞播散和腫瘤的生長。實驗方法原理將表達GFP的質粒pRNAT-U6/Neo轉染人肺腺癌細胞A549，G418篩選獲得穩定表達GFP細胞，對比轉染前后細胞的生長活性和成瘤性。將轉染后細胞原位種植裸鼠預定標準處死。HE染色和免疫組化檢測轉移灶的位置和數目。利用KODAKIS2000MM系統檢測腫瘤播散情況。實驗材...
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