一、人源化小鼠模型的定義與核心價值

1. 基本概念

人源化小鼠（Humanized mice）指通過基因編輯或細胞移植技術，使小鼠攜帶人類基因、細胞、組織或免疫系統的實驗模型。其核心價值在于：

• 突破物種限制：解決小鼠模型與人類生物學差異（如免疫應答、藥物代謝差異），提高臨床前研究預測性。

• 倫理替代方案：規避直接人體實驗的倫理約束，實現人類疾病機制深度解析。

• 精準醫療橋梁：為個體化治療提供“活體測試平臺"（如PDX模型指導腫瘤用藥）。

2. 模型分類體系

二、構建方法的技術路線與創新突破

1. 基因編輯人源化模型

(1) 核心步驟

• 靶點選擇：優先選擇與人類同源性低的關鍵基因（如免疫檢查點PD-1/CTLA-4）。

• 載體創新：

• CRISPR/Cas9介導同源定向修復（HDR） ：實現精確基因替換（效率＞80%）。

• TurboKnockout-Pro技術：支持Mb級大片段插入，構建全人源化模型（如CD3人源化）。

• 案例：

• CD73人源化：優化sgRNA設計，實現外顯子高效替換，用于聯合用藥篩選。

• KDR（VEGFR2）人源化：人源序列插入小鼠Kdr基因外顯子4，模擬血管生成藥物反應。

(2) 技術瓶頸與解決方案

2. 細胞/組織移植模型

(1) 免疫系統人源化流程

基于的標準化操作：

1. 宿主準備：

• 免疫缺陷小鼠品系選擇：NOD-scid IL2Rγnull（NOG/NSG）＞ NOD-scid ＞ SCID。

• 預處理：亞致死劑量輻照（2-4 Gy）或布斯法尼（Busulfan）處理。

2. 細胞移植：

• HSC移植：胎兒肝臟/臍帶血CD34+細胞（≥1×105個）經靜脈/肝內注射。

• PBMC移植：成人外周血單核細胞腹腔注射（易引發GVHD，限短期實驗）。

3. 免疫重建驗證：

• 流式檢測人CD45+細胞占比（＞25%為合格）。

• 功能性驗證：抗原刺激后產生人IgG/IgA（如脾臟Ig+ B細胞）。

(2) 前沿優化策略

• 細胞因子人源化加持：共移植表達人IL-7/15的基質細胞，提升T/NK細胞分化。

• 組織工程改造：腎包膜下植入人胎兒胸腺/肝臟組織，形成人淋巴結構。

• GVHD控制：使用CRISPR敲除人T細胞中CD3ε基因，延長模型存活期。

3. 雜交模型（Hybrid Approaches）

• 人源化腫瘤移植（PDX）：
  患者腫瘤組織→移植至免疫系統人源化小鼠→保留腫瘤微環境。

• 基因-細胞雙人源化：
  在IL2Rγ-/-小鼠中植入人HSC，并表達人SIRPα增強巨噬細胞功能。